如何看流式细胞周期结果图?
介绍流式结果中坐标轴的显示方式,重点讲解Linear(线性)、Logarithmic(对数)和Biex(双指数)三种。Linear(线性)坐标轴刻度线性递增,适用于检测信号跨度较小时,能清晰展示信号差异。常见如细胞直径FSC、细胞内颗粒度SSC及细胞周期DNA含量的分析。但当信号跨度大,使用Linear坐标轴可能不理想,如图2所示。
以流式细胞仪检测细胞凋亡为例,荧光强度散点图(如图7所示)的解读如下:Q1区域:Annexin V-PI+,可能是已经没有细胞膜的细胞碎片,或者其他原因导致的坏死细胞。Q2区域:晚期凋亡细胞或坏死细胞Annexin V+/PI+。Q3区域:正常(活)细胞Annexin V-/PI-。Q4区域:早期凋亡细胞Annexin V+/PI-。
细胞周期至少有两种做法,最常见的如下图分析:这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期。红色的gate就是G1期,绿色的就是S期,橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析 如果单用PI等DNA染料染色,需要专业软件来分析计算了。
流式检测结果图:根据细胞DNA含量(横坐标)结合纵坐标的细胞数量来分析细胞周期。G0/G1期为第一个峰,S期为第二个不高但很宽的峰,G2/M期为第三个峰。
查看周期图:点击“OK”后,进入结果分析界面,选择设置的荧光通道查看细胞周期图。通过观察G0/G1期、S期、G2期和M期的分布,分析细胞周期的各个阶段。结果储存:储存结果:将分析结果储存为所需的格式,如Excel、PDF等,方便后续的数据处理和报告撰写。
如何做好细胞周期检测?教你轻松搞定!
1、细胞固定:固定细胞时,需确保细胞充分分散成单细胞后再缓慢滴加无水乙醇,以防细胞聚团。细胞染色:RNA酶消化和PI染色需充分且避光进行,以保证染色效果。上机检测:检测前需重悬成细胞悬液,避免细胞聚团导致仪器堵塞。数据质量:关注CV值、细胞碎片和聚集体等指标,确保数据质量。
2、充分混匀细胞,利用流式细胞仪进行细胞周期检测。在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。实验技巧与注意事项 细胞悬液的制备:由于流式分析时需要的是单个细胞悬液,因此在操作过程中需充分混悬细胞,避免细胞成团。
3、优化细胞培养条件 选择对数生长期的细胞:对数生长期的细胞增殖活跃,处于细胞周期的比例较高,有利于获得准确的细胞周期数据。 合理控制细胞密度:在细胞给药时,细胞密度应控制在适宜范围内,避免细胞密度过高或过低影响细胞周期的检测。
细胞周期数据分析求助
1、细胞周期至少有两种做法,最常见的如下图分析:这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期。红色的gate就是G1期,绿色的就是S期,橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析 如果单用PI等DNA染料染色,需要专业软件来分析计算了。比如这个图,是DNA染料单染,其中粉色部分是G1期,黄色部分是S期,绿色部分是G2/M期。中间的分布一般是通过FlowJo这样的软件计算自动生成的。
2、细胞周期的精密调控是生命过程中不可或缺的,它被划分为间期(GS、G2)和分裂期(M期)两个核心阶段。在Seurat的分析框架中,我们关注的是如何处理scRNA-seq数据中可能潜藏的细胞周期系统偏倚。
3、细胞周期分析 细胞周期是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程,它分为间期与分裂期两个阶段。间期又进一步细分为DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期),而分裂期则被称为M期。
4、采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。实验数据分析 流式检测法分析细胞周期通常根据细胞DNA含量(横坐标)结合纵坐标的细胞数量来分析。常见的细胞周期分布图包括G0/G1期、S期和G2/M期三个峰。G0/G1期:流式检测结果图的第一个峰,表示DNA复制尚未开始的时期。
请教细胞周期分析原理和分析结果解释
在流式细胞术中,分析细胞周期常用的方法是基于细胞DNA含量的变化。G1期的细胞DNA含量最少,因此在流式检测结果图中表现为第一个峰。S期的细胞开始复制DNA,这一过程从一倍DNA到二倍DNA,因此在流式结果图中显示的跨度较大,表现为第二个峰。
博凌科为生物科技-为你解细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间。
在单细胞scRNA-seq分析中,细胞周期是一个重要的混杂因素。由于细胞周期引入了细胞内异质性,从而可能掩盖细胞类型之间的表达差异。因此,在进行差异表达基因鉴定等下游分析时,通常需要排除细胞周期基因或增殖细胞的影响。
想知道“细胞周期”的检测方法吗?点它!
细胞周期的检测主要依赖于流式细胞术,通过碘化丙啶(PI)染色测定细胞内DNA的含量,进而分析细胞所处的周期阶段。以下是详细的检测方法:原理 碘化丙啶是一种双链DNA的荧光染料,与双链DNA结合后可以产生荧光,且荧光强度与双链DNA的含量成正比。
细胞培养:首先取对数生长期的细胞,以1×10^6 cells/mL的密度接种到24孔板或6孔板中,每孔加入1 mL或2 mL细胞悬液。在所需的处理条件下(例如添加药物)培养一段时间后,终止培养并准备进行后续实验。 细胞固定:将培养好的细胞以800 rpm离心5分钟,收集细胞沉淀。
在进行细胞周期检测时,首先需要培养细胞。选取处于对数生长期的细胞,按照1×106 cells/mL的比例,以1mL接种至24孔板或2mL接种于6孔板中。根据实验需求,可以在培养过程中加入特定的药物处理。在设定的时间点终止培养后,准备进行下一步实验。接下来是细胞固定步骤。
方法:通过流式细胞术测量DNA含量来区分细胞所处的周期阶段。原理:不同周期的细胞DNA含量不同,如G1期细胞DNA含量为2N,S期细胞DNA含量介于2N到4N之间,G2/M期细胞DNA含量为4N。有丝分裂/增殖Marker:标记物:组蛋白H3磷酸化和微管蛋白Alpha Tubulin。
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